Aprotinin CAS 9087-70-1

Aprotinin78R2S7, foirmle mhóilíneach C284H432N84O, CAS 9087-70-1, Is inhibitor protease is féidir a chosc trypsin agus chymotrypsin, cosc ​​a chur ar ghníomhachtú proteasomes gníomhacha eile sa briseán agus an gníomhachtú féin trypsinogen. Úsáidtear go cliniciúil chun pancreatitis géarmhíochaine a chosc agus a chóireáil, fuiliú de bharr fibrinolysis, agus téachtadh infhéitheach a scaipeadh. Is féidir é a úsáid freisin le haghaidh cóireála frith-turraing. Is substaintí iad coscairí próitéáis atá in ann ceangal a dhéanamh le heinsímí agus ráta díghrádaithe an tsubstráit a laghdú. Tá coscairí protease a bhfuil airíonna próitéine acu i láthair go forleathan, agus tá dhá chineál coscairí protease a bhfuil airíonna próitéine acu scoite amach ó pónairí soighe: inhibitor Kuniz trypsin agus inhibitor Baumann Bellck. Tá meáchan móilíneach 20-25 ku ag an gcéad cheann, agus tá meáchan móilíneach 8 ku ag an dara ceann.

athchuingreachaprotinin(RTI16) is féidir le kininase agus trypsin a chosc, agus is coscaire serine protease neamh-shonrach nádúrtha é. Próitéin bhunúsach slabhra shingil í atá comhdhéanta de 58 n-iarmhar aimínaigéad, agus 3 nasc déshuilfíde trasna-nasctha sa slabhra. Ar feadh i bhfad, baineadh úsáid as aprotinn le haghaidh cóireáil pancreatitis géarmhíochaine. Tar éis na 1990idí, thosaigh aprotinn athchuingreach le húsáid i máinliacht cardiothoracic chun pláitíní a chosaint, fuiliú agus exudation a laghdú, agus chun cóireáil chliniciúil a dhéanamh ar othair a bhfuil neamhoird téachta orthu. Dá bhrí sin, tá méadú tapa tagtha ar mhéid an mhargaidh aprotinn agus tháinig sé ar cheann de na drugaí bithcheimiceacha tábhachtacha.

Sintéis

 

Faoi láthair, is iad na hullmhúcháin athchuingreach aprotinn atá ar fáil go tráchtála ná sleachta go príomha ó orgáin mar scamhóga bó-ainmhithe, a bhfuil próisis chasta agus costais arda acu. Dá bhrí sin, tá sé thar a bheith tábhachtach iniúchadh a dhéanamh ar tháirgeadh aprotinn athchuingreach ag baint úsáide as modhanna innealtóireachta géiniteacha.

Nuair a bhíonn córas léirithe secretion á úsáid, tá táirgeadh aprotinn íseal i gcoitinne, agus tá gníomhaíocht an táirge mar thoradh air íseal freisin. Trí léiriú comhleá, táthar ag súil go méadóidh sé go mór leibhéal slonn na n-aprotinn athchuingreach.

 

Tógadh slonn athchuingreach aprotinn plasmid pGrxA BPTI chun na críche seo, agus dearadh suíomh aitheantais do FXa idir an comhpháirtí comhleá agus an aprotinn athchuingreach. Tar éis é a chur in iúl i bhfoirm comhlacht cuimsithe, rinneadh an comhpháirtí comhleá a íonú agus a athfhillte trí scagachán glóthach. Bhí excised an comhpháirtí comhleá ag FXa a fháil próitéin leis an ngníomhaíocht chéanna leis an táirge nádúrtha. Trí bharrfheabhsú na gcoinníollacha cainte, feabhsaíodh an toradh go suntasach i gcomparáid le córais slonn roimhe seo.

Optamú léiriú baictéir innealtóireachta:

 

Baictéir feadáin gliocról a ionaclú ar phlátaí agar LB/AMP, saothraítear iad ag 37 céim ar feadh 20 uair, scríobadh na coilíneachtaí agus iad a ionaclú i 5 ml de mheán leachtach LB/AMP ag 37 céim , 200 r/nóiméad, agus cultúr thar oíche. Ionaclú 5% den inoculum i 100 ml de mheán sciodair arbhair, cultúr ag 37 céim agus 220 r/nim ar shaker, aslú ar feadh 7 uair an chloig, agus ansin lártheifneoir (8000 r/nim, 5 min, 4 céim ) a bhailiú na cealla baictéarach. Meáigh meáchan fliuch na gceall baictéarach agus faigh a slonn faoi 15% SDS-LEATHANACH.

Saothrú umar choipeadh

 

Saothrú umar choipeadh:

Ag baint úsáide as umar coipeadh Gearmánach Biostat 30 L, ag 37 céim, le ocsaigin tuaslagtha rialaithe ag 20%, pH 7.0. Ag baint úsáide as umar choipeadh chun an próitéin comhleá a chur in iúl, fuarthas 260 g de chealla fliuch baictéarach ó 16 L de brat choipeadh, thart ar 16 g/L; Tá an leibhéal slonn thart ar 45%,

Briseadh balla agus cuimsiú corpán cealla baictéaracha a fháil:

 

Tar éis an saothrú a bheith críochnaithe, bailigh na cealla baictéarach, cuir 1 g de chealla baictéaracha le 10 mL de thuaslagán A (50 mmol / L Tris HCl, pH 8.0, 1 mmol / L EDTA), cuir ar fionraí iad go maith, sonicate na cealla i folctha oighir, ag obair ar feadh 30 soicind, eatramh ar feadh 10 soicind, cumhacht 300 W. Aistrigh an leacht isteach i bhfeadán lártheifneora, lártheifneoir ag 4 céim agus 8000 r/nim ar feadh 15 nóiméad, agus is é an deascán an comhlacht cuimsithe amh.

Réiteach díscaoilte coirp cuimsithe a ullmhú:

 

Nigh an corp cuimsithe amh le tuaslagán B (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 1 mmol/L EDTA, 1% Triton-X100) faoi dhó, gach uair ar feadh 0.5 uair, lártheifneoir chun an comhshnáthán a bhaint, agus faigh corpáin chuimsithe réasúnta íon. Cuir 1 g de choirp chuimsithe le 5 mL de thuaslagán C (50 mmol/L Tris HCl, pH 8.0, 8 mol/L úiré, 1 mmol/L EDTA, 5 mmol/L DTT), gor thar oíche ag 4 céim , dínádúrú agus tuaslagtha, lártheifneoir ag 12000 r/nóiméad, bailiú an tuaslagáin ar feadh 15 min. Faigh aprotinn athchuingreach.

Éifeachtaí cógaseolaíochta:

 

 

Aprotinincuireann sé bac ar trypsin daonna, einsím fibrinolytic, plasma, agus angiotensin fíocháin trí choimpléisc inchúlaithe einsímeacha a fhoirmítear i gcóimheas ceimiceach áirithe. Tá ról mór ag próitéisí le gníomhaíocht serine sa chóras kininogen vasopressin, an córas comhlántach, agus an córas téachta, áit a bhfuil ról ríthábhachtach ag plasmin agus plasma vasopressin.

 

Feidhmíonn Aprotinn a éifeacht coisctheach trí choimpléasc aprotinn protease a fhoirmiú tríd an gcuid serine gníomhach ar an einsím. Mar sin féin, nuair a chomhcheanglaítear é le próitéasanna éagsúla, taispeánann sé tairisigh díthiomsaithe éagsúla. Is é an ceangal le trypsin an ceann is láidre (Ki{=0.06nmoN), atá ar cheann de na tairisigh is ísle a tuairiscíodh in idirghníomhaíochtaí próitéine (Laydunski et al. 1974). Níl an ceangailteach le heinsím fibrinolytic daonna an-láidir. Mar gheall ar ard-luach K an choimpléasc coscaire einsím (Ki=1 nmoN), d’fhéadfadh sé a bheith inchúlaithe (Wimann, 1980), agus tá an coimpléasc a cheanglaíonn angiotensin plasma daonna lag go leor (Ki=30 nmol/l), ach fós laistigh den raon teiripeach aprotinn (Nakahara, 1983).

 

Ní hamháin go gceanglaíonn Aprotinn le móilíní einsímí saor in aisce, ach freisin le heinsímí atá ceangailte le tríú comhábhar cheana féin (má tá cumas ceangailteach fós ag lárionad gníomhach na heinsíme). Mar sin, cuireann aprotinn bac ar einsímí fibrinolytic saor in aisce agus féadann sé bac a chur ar choimpléasc kinase slabhra fibrinolysin idirmheánach a foirmíodh le linn teiripe thrombolytic le slabhra kinase (Wimann, 1980).
Tá éifeacht frith-fibrinolytic aprotinn bunaithe ar chosc ar plasmin a ghníomhaíonn hidrealú próitéine. Murab ionann agus tuaslagóirí frith-fibrinolytic sintéiseacha, mar gheall ar a chosc díreach ar plasmin róghníomhaithe, ní hamháin go gcosnaíonn aprotinn an tsubstráit dhíreach (fibrin) ó dhíghrádú plasmin, ach cosnaíonn sé freisin fibrinogen, fachtóirí V agus VIII i plasma, agus alfa 2-globulin i serum.

 

I dturgnaimh turrainge spreagtha endotoxin agus turraing hypovolemic, is féidir le Trasylol bac suntasach a chur ar ghníomhachtú cineinogen. (Maise et a1.1972).
Is féidir le Trasylol forbairt éidéime interstitial scamhógach (scamhóg turraing) a chosc nó a mhoilliú. Braitheann a éifeacht coisctheach ar dháileog agus ar am-spleách (Lorthioir et al., 1973).
Le linn turrainge, is féidir le briseán ischemic substaint peiptíde an-tocsaineach a tháirgeadh, eadhon fachtóir coisctheach miócairdiach (MDF). Tá dlúthbhaint ag an bhfachtóir seo le bás ó turraing.

 

Is féidir MDF a bhrath i bplasma lucha, madraí, mhoncaí, agus daoine le turraing hemorrhagic, seipteach, cardiogenic, agus turraing dóite. Is féidir le MDF a bheith ina chúis le laghdú ar chonarthacht miócairdiach i ngach cás de fhuiliú, agus ag an am céanna, is cúis le sárú soithí frithsheasmhachta visceral, rud a fhágann ischemia áitiúil agus táirgeadh níos mó MDF. Thairis sin, mar gheall ar an damáiste tocsaineach a dhéantar don chóras reticuloendothelial, cuirtear moill ar a imréiteach sa tsruth fola. Is féidir le Trasylol cosc ​​​​a chur go mór ar tháirgeadh MDF (Lefer 1984).

Aprotinin, mar chomhdhúil móilín beag a chuireann in aghaidh fibrinolysis, a thaispeánann airíonna coisctheacha einsím suntasacha agus sonracha. Ní hamháin go gcuireann sé bac ar ghníomhaíocht trypsin go héifeachtach, ach gníomhaíonn sé go forleathan freisin ar einsímí próitéalaíocha gaolmhara eile, agus mar sin tá ról tábhachtach aige i dturgnaimh bhitheolaíocht cille. Go háirithe le linn lysis cille agus fíocháin agus homogenization, is féidir Aprotinn fónamh mar inhibitor protease éifeachtach, a chosc go héifeachtach díghrádú thimpiste ar phróitéiní sprioc, rud atá ríthábhachtach chun sláine sampla agus cruinneas a chothabháil.

Léiríonn éifeacht coisctheach Aprotinn spleáchas dáileog soiléir, is é sin, de réir mar a mhéadaíonn a tiúchan, méadaíonn an éifeacht coisctheach ar ghníomhaíocht fibrinolytic dá réir sin freisin. Cuireann an ghné seo ar chumas taighdeoirí coinníollacha turgnamhacha a rialú níos cruinne chun torthaí turgnamhacha níos iontaofa agus níos in-atáirgthe a fháil. Idir an dá linn, is féidir le Aprotinn am téachtadh na fola a shíneadh freisin, ag dearbhú tuilleadh a ról tábhachtach sa mheicníocht téachta. Tá sé léirithe ag turgnaimh in vitro go bhfuil Aprotinn ina choscóir éifeachtach ar chonair théachtaithe inghineach ar féidir leis cur isteach ar phríomhphróisis sa phróiseas téachta agus iad a rialáil.

Tá a éifeachtaí cógaseolaíochta uathúla léirithe ag Aprotini freisin. Féadann sé bac suntasach a chur ar phróiseas díscaoilte na clotanna fola in vitro, síneadh a chur le ham fuilithe bearradh eireaball i bhfrancaigh, agus an t-am téachta i bplasma daonna a fhadú. Tugann na torthaí seo le fios go bhféadfadh éifeachtaí frith-fuilithe agus frith-thrombacha a bheith ag Aprotinn. Chun a éifeacht in vivo a bhailíochtú tuilleadh, rinne taighdeoirí turgnaimh ar mhúnla gearrchiorcaid arteriovenous francach. Léirigh na torthaí gur féidir le Aprotnin meáchan clotanna fola a laghdú go suntasach, ag tacú lena chumas mar dhruga antithrombotic a thuilleadh.

Go hachomair, léirigh Aprotnin, mar chomhdhúil bheag mhóilín a choisceann fibrinolysis, airíonna coisctheacha suntasacha einsímeacha agus éifeachtaí cógaseolaíochta in vitro agus in vivo araon. Soláthraíonn a chur i bhfeidhm i dturgnaimh bhitheolaíocht ceall uirlisí cumhachtacha do thaighdeoirí, agus soláthraíonn a thorthaí i staidéir in vivo leideanna agus bunús tábhachtach dá fhorbairt mar dhruga frith-fuilithe agus frith-thrombóideacha. Sa todhchaí, le tuilleadh taighde ar mheicníocht gníomhaíochta Aprotnin agus trialacha cliniciúla, táthar ag súil go bhfeicfidh muid a fheidhm níos leithne sa réimse leighis.

Clibeanna Te: aprotinin cas 9087-70-1, soláthraithe, monaróirí, monarcha, mórdhíola, ceannach, praghas, mórchóir, ar díol