Peiptíd Aicéatáit Gonadorelin

Ceanglaíonn sintéis chéim leachtach aimínaigéid de réir a chéile trí straitéis ghrúpa cosanta i dtuaslagán, atá oiriúnach do shintéis slabhraí gearra polaipeiptíde ina bhfuil struchtúir speisialta cosúil le bannaí disulfide. Tá an croí i seicheamh roghnú agus baint na ngrúpaí cosanta chun frithghníomhartha taobh a sheachaint.

Díchosaint agus íonú:
Ag baint úsáide as TFA chun grúpaí Boc agus pyridine a bhaint as grúpaí Fmoc a bhaint, fuarthas peptide líneach PyrHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGlyNH2.
Íonú trí HPLC agus -triomú a reo chun Gonarelin amh a fháil.

Buntáistí: Rialú cruinn ar choinníollacha imoibrithe, atá oiriúnach do shintéis slabhra peptide casta; Níl gá le hiompróirí céim soladach, costais a laghdú.
Teorainneacha: Tá na céimeanna achrannach agus éilíonn siad ilíonachtaí; Is gá na hidirmheánacha imoibrithe a íonú chun an timthriall táirgthe a leathnú.

Bhain staidéar áirithe úsáid as modh sintéise céime leachta chun an fhoirmle imoibrí gearrtha a bharrfheabhsú (88% TFA+5% suilfíd ainíse+5% uisce+2% ethanedithiol), rud a mhéadaigh an táirgeacht amh go 91.8% agus íonacht an táirge go dtí os cionn 99%.

Is é foirmle mhóilíneach Gonarelin Acetate ná C ₅₇ H ₇₉ N ₁₇ O ₁₅, le meáchan móilíneach 1242.36 Da. Is slabhra decapeptide é a chroí-struchtúr, comhdhéanta de na sraitheanna aimínaigéad seo a leanas:

5-Oxopropil-L-Histoyl-L-tryptophan-L-tryptophan-L-tryptophan{{1 0}L{11}}tyrosyl-glycyl-L-leucyl-L-arginil-L-prolyl-glycinamide.
Sa struchtúr seo, cruthaíonn an chéad 5-oxoproline (aigéad Pyroglutamic) struchtúr timthriallach, rud a fheabhsaíonn cobhsaíocht mhóilíneach; Is teascáin sholúbtha iad glicín (Gly) ag suíomh 6 agus glycinamide (Gly-NH ₂) ag suíomh 10 a thugann solúbthacht comhfhoirmiúil don mhóilín; Tá fáinní aramatacha sa tríú tryptophan (Trp) agus an cúigiú tyrosine (Tyr) agus féadfaidh siad páirt a ghlacadh in idirghníomhaíochtaí idirmhóilíneacha trí chruachadh π - π.
Ní hamháin go bhfeabhsaíonn tabhairt isteach foirm aicéatáit (CH3 COO ⁻) tuaslagthacht an druga (le tuaslagthacht uisce suas le 25 mg / ml), ach ceanglaíonn sé freisin grúpaí aimín nó carbocsaileacha an slabhra trí bhannaí ianach, ag cruthú struchtúr cobhsaí salainn agus ag laghdú an baol díghrádú slabhra peptide le linn stórála.

Éilíonn cumas grúpaí hiodrocsaile, aimín, carbocsaileacha bannaí hidrigine a fhoirmiú le móilíní uisce a stóráil i dtimpeallacht thirim chun clumping nó díghrádú a sheachaint.
Tuaslagthacht:
Tá tuaslagthacht ard in uisce (25 mg/ml) ag an gcomhdhúil seo, tá sé beagán intuaslagtha i meatánól, agus is féidir é a thuaslagadh go hiomlán i dtuaslagán d'aigéad aicéiteach 1%. Tá tionchar suntasach ag a intuaslagthacht ar pH: faoi choinníollacha aigéadacha (cosúil le haigéad aicéiteach 1%), laghdaíonn prótónú carboxyl éaradh leictreastatach idirmhóilíneach agus cuireann sé díscaoileadh chun cinn; I dtimpeallachtaí neodracha nó alcaileacha, d'fhéadfadh díprotonú grúpaí carboxyl comhiomlánú idirmhóilíneach a spreagadh, rud a fhágann go laghdófar tuaslagthacht.

Leáphointe agus cobhsaíocht theirmeach:
Léiríonn sonraí turgnamhacha go bhfuil an pointe leá níos airde ná 155 céim C (dianscaoileadh), rud a léiríonn cobhsaíocht theirmeach láidir. Mar sin féin, féadfaidh teocht ard a bheith ina chúis le hidrealú bannaí peptide nó ocsaídiú slabhra taobh aimínaigéad, agus mar sin ní mór an stóráil iarbhír a rialú laistigh den raon -20 céim C go 8 céim C chun moill a chur ar dhíghrádú.

Saintréithe speictreach:
Léiríonn an speictream ionsú UV buaic uasta ionsú ag 278 nm, a fhreagraíonn do chóras comhchuingeach fáinne aramatacha tryptophan agus tyrosine. Is féidir an ghné seo a úsáid le haghaidh anailís chainníochtúil (cosúil le cinneadh speictrophotometric ábhar), nó chun íonacht a chur i gcomparáid le caighdeáin tagartha trí chrómatagrafaíocht chiseal tanaí (TLC).

COBHSAÍOCHT HYDROLYTIC
Réasúnta cobhsaí faoi choinníollacha aigéadacha nó neodracha, ach seans maith go hidrealú banna peptide i dtimpeallachtaí alcaileach. Mar shampla, faoi ghníomhaíocht bunanna láidre (cosúil le NaOH), féadfaidh an banna peptide idir an 6ú glicín agus an 7ú leucine briseadh, rud a ghineann blúirí peptide gearr. Ina theannta sin, tá fáinne indole an tríú tryptophan seans maith ar oscailt fáinne faoi choinníollacha éadroma nó ocsaídiúcháin, rud a fhágann go gcailltear gníomhaíocht drugaí.

I láthair ocsaigine nó fréamhacha saor in aisce, féadfaidh na grúpaí feidhme seo dul faoi imoibrithe ocsaídiúcháin, ag giniúint sárocsaídí nó díorthaigh hiodrocsaile, rud a spreagann díghrádú slabhra. Dá bhrí sin, is minic a chuirtear frithocsaídeoirí (cosúil le vitimín C) le foirmlithe chun cobhsaíocht a fheabhsú.

Cobhsaíocht éadrom
D'fhéadfadh íogaireacht chun solais, go háirithe solas ultraivialait (200-400 nm), cur isteach go díreach ar an gcóras comhchuingeach de tryptophan nó díghrádú ocsaídiúcháin a spreagadh go hindíreach trí shaorfhréamhacha a ghiniúint. Ba chóir instealltaí cliniciúla a phacáistiú i mbuidéil ghloine dhonn agus iad a stóráil ar shiúl ó sholas.

Gníomhaíocht ceangailteach an ghlacadóra
Trí cheangal ardchleamhnas a dhéanamh leis an ngabhdóir GnRH sa fhaireog pituitary anterior trína struchtúr deich, spreagtar comharthaíocht intracellular (cosúil le cosán cAMP/PKA), rud a fhágann go scaoiltear gonadotropins (FSH, LH). Braitheann a ghníomhaíocht cheangailteach ar:
an chomhlántacht idir struchtúr timthriallach an chéad 5-oxoproline agus an phóca gabhdóra;
an idirghníomhaíocht π - π idir fáinne aramatacha an tríú tryptophan agus réigiún hidreafóbach an ghabhdóra;
Déantar muirear dearfach an 8ú arginine a mhealladh go leictreastatach chuig iarmhar aigéadach an ghabhdóra.

Meicníocht déphasic
Nuair a dhéantar é a riar go leanúnach sa ghearrthéarma, spreagann sé scaoileadh FSH/LH ón gland pituitary agus méadaíonn sé leibhéil hormóin ghnéis; Is é an toradh a bhíonn ar riarachán fadtéarmach ná cosc ​​ar an secretion FSH/LH mar gheall ar dhí-íogrú gabhdóirí, ag laghdú hormóin ghnéis go leibhéil choilleadh ar deireadh thiar. Déanann an tréith seo é mar mhalairt ar choilleadh máinliachta i gcóireáil ailse próstatach, agus ag an am céanna laghdaítear an baol a bhaineann le deacrachtaí máinliachta.

Táirgí díghrádaithe polymorphic:
Le linn an phróisis meitibileach sa chorp, féadfar meitibilítí éagsúla a ghiniúint trí hidrealú einsímeach (cosúil le gníomh peptidase) nó díghrádú neamh-einsímeach (cosúil le ocsaídiú). Mar shampla, féadfar an 6ú glicín a hidrealú chun blúire naoi peptide a ghiniúint; Gineann ocsaídiú tryptophan sa tríú háit díorthaigh hiodrocsaile. Ní mór gníomhaíocht na meitibilítí seo a shainaithint le mais-speictriméadracht (LC-MS) nó trí athshondas maighnéadach núicléach (NMR) chun a sábháilteacht a mheas.
Idirghníomhartha drugaí:
Nuair a úsáidtear é i gcomhcheangal le drugaí ina bhfuil iain miotail (cosúil le antaibheathaigh áirithe), tuaslagthacht nó gníomhaíochtpeptide aicéatáit gonadorelina laghdú mar gheall ar chelation. Ina theannta sin, féadfaidh a fhoirm salainn aigéadach dul faoi imoibrithe neodraithe le drugaí alcaileach (cosúil le frithhistamíní), agus ba cheart instealltaí measctha a sheachaint.